A2780+GFP 人卵巢癌細(xì)胞+GFP

 

細(xì)胞介紹

 

該細(xì)胞通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶GFP基因。

 

細(xì)胞特性

 

1）來(lái)源：卵巢

 

2）形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長(zhǎng)

 

3）含量：>1x10^6  細(xì)胞數(shù)

 

4）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

 

5）用途：僅供科研使用。

 

細(xì)胞篩選

 

該細(xì)胞為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染GFP的細(xì)胞，隨細(xì)胞傳代次數(shù)的增加，其GFP熒光強(qiáng)度會(huì)逐漸減弱。若實(shí)驗(yàn)要求需要維持熒光強(qiáng)度，可以加入嘌呤霉素進(jìn)行再次篩選。

 

建議收到細(xì)胞后至少傳3代，凍存留種后再進(jìn)行篩選。

 

初次進(jìn)行細(xì)胞篩選時(shí)，建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的wan全培養(yǎng)基維持培養(yǎng)，若無(wú)細(xì)胞漂浮或者漂浮較少，即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的wan全培養(yǎng)基繼續(xù)篩選，以此類(lèi)推，至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過(guò)程中，漂浮細(xì)胞大于60%，則停止篩選，換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng)，至細(xì)胞密度約80%，可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進(jìn)行篩選。當(dāng)加入5ug/ml嘌呤霉素時(shí)細(xì)胞正常增殖，可停止篩選，用不含藥wan全培養(yǎng)基正常培養(yǎng)。

 

運(yùn)輸和保存

 

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

 

（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

 

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

 

細(xì)胞接收后的處理

 

1）收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

 

2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10X,20X）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

 

3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的wan全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。

 

4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的wan全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。                       

 

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備

 

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基；10%優(yōu)質(zhì)胎牛血清；1%GlutaMAX-1谷an酰an；1%  P/S  雙抗 ；

 

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

 

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

 

二、細(xì)胞處理：

 

1） 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：

 

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mLwan全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，wan全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8mlwan全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。

 

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

 

對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：

 

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

 

2. 加入0.25％（w / v）yi蛋白mei-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。

 

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的wan全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

 

3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

 

下面T25瓶為例；

 

1. 細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml.

 

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

 

3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過(guò)夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

 

注意事項(xiàng)

 

1.收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

 

2.收到細(xì)胞先不開(kāi)瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過(guò)程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷(xiāo)售依據(jù)。

 

3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?，故本公司只保證客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài)，故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問(wèn)題后客服人員溝通的時(shí)間證明，期間間隔時(shí)間不能大于7天。

 

4.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

 

5.客戶在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，有任何技術(shù)問(wèn)題可以聯(lián)系我們售后，隨時(shí)給予解答。

 

A2780+GFP 人卵巢癌細(xì)胞+GFP相關(guān)熱賣(mài)細(xì)胞

 

人肺癌細(xì)胞+RFP A549+RFP

 

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人真皮成纖維細(xì)胞（原代細(xì)胞永生化） HSF(SV40)

 

人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（原代細(xì)胞永生化） HUVEC

 

人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞永生化+RFP HUVEC+RFP

 

人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞永生化+GFP HUVEC+GFP

 

人結(jié)直腸癌細(xì)胞氟niao嘧啶耐藥株 LOVO/5FU

 

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人肝星形細(xì)胞+GFP LX-2+GFP

 

人乳腺癌阿mei素耐藥細(xì)胞 MCF-7/Adr

 

人乳腺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 MCF-7+luc

 

人乳腺癌X細(xì)胞+GFP MDA-MB-231+GFP

 

人乳腺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 MDA-MB-231+LUC

 

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人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 sh-sy5y轉(zhuǎn)染野生型

 

人乳腺癌細(xì)胞 SK-BR-3+LUC

 

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人卵巢癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 SK-OV-3+LUC

 

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞+luc SW620+luc

 

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞+GFP SW620+GFP

 

人結(jié)直腸癌細(xì)胞氟niao嘧啶耐藥株 SW620/5FU

 

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人類(lèi)星形膠質(zhì)瘤耐替莫cuo胺細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 U251 MG/TMZ+LUC(3000)

 

人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤+RFP U87MG+RFP

 

云南宣威人肺腺癌細(xì)胞系+GFP XWLC-05+GFP

 

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小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 CT26+LUC

 

小鼠膠質(zhì)細(xì)胞瘤熒光素酶標(biāo)記 GL-261+luc

 

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小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 MC38+LUC

 

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 MEF(silie霉素C處理)

 

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小鼠胰腺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 panc02+LUC

 

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人胰腺癌細(xì)胞永生化

 

人膽囊上皮細(xì)胞永生化+GFP GFP

 

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人頸靜脈球瘤細(xì)胞永生化

 

人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞永生化

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TOV-112D 人上皮性卵巢癌細(xì)胞	OVCAR-8/ADR 人卵巢癌腺癌阿mei素耐藥細(xì)胞	SK-OV-3+luc 人卵巢癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記
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