國產(chǎn)無外泌體血清（WINSERA® FBS050-EXO）

貨號：FBS050-EXO

規(guī)格：50ml

品牌：WinSera ®

品牌：WINSERA®國內(nèi)科研實驗室使用比較普遍，價格相對實惠，能滿足很多常規(guī)細胞的培養(yǎng)需求。

相對而言，國產(chǎn)品牌血清由于采血的不可控性和生產(chǎn)工藝的差別，質(zhì)量參差不齊，最讓人擔心的還是批間差異大，質(zhì)量不穩(wěn)定。

它來了 它來了  2022它風風火火的走來了~~

WINSERA是我司專屬品牌，也是一款國產(chǎn)血清，但它與市場上的國產(chǎn)血清不一樣~※選用無疫情、天然草場放牧的健康孕牛,剖腹取胎牛,采用全封閉穿刺采血、快速低溫分離技術(shù)以及產(chǎn)品的溯源體系，確保了WINSERA血清的品質(zhì)！

※生產(chǎn)過濾采用多級高置留膜過濾和3次0.1μm終端微濾方法,杜絕了血清中支原體污染！

※構(gòu)建了全面的質(zhì)檢體系，不僅對廠房、設(shè)備、原血清采集過程、血清過濾過程、血清灌裝過程、包裝過程、檢驗過程等進行驗證。對生產(chǎn)工藝的回顧性、檢驗方※血清是天然制品，每個批次之間都存在差異，WINSERA血清使用大規(guī)模持續(xù)性生產(chǎn)，保障了不同批次間的低差異性以及快速交付的能力！

外泌體——基礎(chǔ)知識篇

細胞外囊泡（Extracellular Vesicles，EVs）是指細胞主動分泌的具有膜結(jié)構(gòu)的微小囊泡的統(tǒng)稱，幾乎所有的細胞都會分泌EVs，然而EVs最初被認為是細胞向外排泄的“垃圾"，是細胞移除碎片和清除特定大分子的一種途徑。根據(jù)大小、生物特性和形成過程的不同，EVs主要分為外泌體（exosomes）、微囊泡（microvesicles）、和凋亡小體（apoptotic bodies）三大類。近十年來，研究學者重新認識了EVs的重要性，越來越多的研究發(fā)現(xiàn)EVs可以作為遺傳信息的傳遞者，攜帶和傳遞信號分子運輸?shù)较噜忂h處的細胞，從而調(diào)節(jié)細胞的生理和病理的狀態(tài)，參與許多疾病的發(fā)生發(fā)展過程，其中對于外泌體的研究最為火熱。

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外泌體——研究思路篇

01外泌體的樣本來源

由于研究細胞分泌的外泌體，需要避免培養(yǎng)基中其它外源性外泌體對細胞分泌外泌體的影響，目前采用以下方法獲取研究樣本：血清饑餓培養(yǎng)、去外泌體血清培養(yǎng)、無血清體系培養(yǎng)、其它樣本來源。

01血清饑餓培養(yǎng)

一般是指通過降低培養(yǎng)液中的血清濃度，使所培養(yǎng)的細胞因缺乏血清中的生長因子而不能分裂，這個操作常用來做細胞同步化分裂。常規(guī)操作就是在細胞培養(yǎng)至融合度為50-60%左右，撤去含血清的*培養(yǎng)基，更換為基礎(chǔ)培養(yǎng)基進行饑餓培養(yǎng)細胞至融合度為80%左右，收獲細胞上清進行下游的研究。但血清饑餓培養(yǎng)收獲的外泌體量有限且質(zhì)量較低。

02去外泌體血清培養(yǎng)

為了減少或避免血清饑餓培養(yǎng)對細胞分泌外泌體的影響，去外泌體血清培養(yǎng)細胞成為大多數(shù)學者選擇的一種方式。去外泌體血清可適用于大部分細胞培養(yǎng)，基本可維持與正常胎牛血清中相同生長速率和形態(tài)。在使用各種方法去除胎牛血清中大部分的外泌體后添加至培養(yǎng)基中配制成去外泌體血清*培養(yǎng)基，應(yīng)用于細胞外泌體的研究。

03無血清體系培養(yǎng)

從饑餓培養(yǎng)到去外泌體血清培養(yǎng)，再到無血清體系培養(yǎng)。這是針對外泌體研究所做出的培養(yǎng)基改善與優(yōu)化。也讓學者們能夠了解到細胞培養(yǎng)所需要的營養(yǎng)成分。目前無血清體系的培養(yǎng)基可分為含血小板裂解物（含外泌體）的無血清培養(yǎng)基、配方明確的無血清培養(yǎng)基等，其中配方明確的無血清體系讓研究細胞外泌體的結(jié)果更加準確。

04其它外泌體樣本的來源

除了細胞來源的外泌體樣本研究最為廣泛，血漿、血清也是多數(shù)學者的研究樣本，其它的樣本包括唾液、腦脊液、乳汁、尿液等生物體液，均可以作為外泌體研究的樣本來源。

HeLa 人宮頸癌細胞

143B 人骨肉瘤細胞

293T 人胚腎細胞

A2780 人卵巢癌細胞

A549 人非小細胞肺癌細胞

A673 人尤因肉瘤細胞

AGS 人胃腺癌細胞

BGC823 人胃腺癌細胞(低分化)

C33A 人宮頸癌細胞

CACO2 人結(jié)直腸腺癌細胞

COLO205 人結(jié)腸癌細胞

DU145 人前列腺癌細胞

ES-2 人卵巢透明細胞癌細胞

H1650 人非小細胞肺癌細胞

H460 人大細胞肺癌細胞

HACAT 人永生化表皮細胞

HCT116 人結(jié)腸癌細胞

HEK-293 人胚腎細胞

HEPG2 人肝癌細胞

HGC-27 人胃癌細胞(未分化)

HT-29 人結(jié)腸癌細胞

t24 人膀胱癌細胞

KYSE150 人食道癌細胞

L02(HL7702)(QSG-7701)(7402)(bel7404) 人正常肝細胞

LOVO 人結(jié)腸癌細胞

MCF-10A 人正常乳腺上皮細胞

MCF7 人乳腺癌細胞

LX-2 人肝星狀細胞

MDA-MB-468 人乳腺癌細胞

MIA Paca2 人胰腺癌細胞

NCI-H1299 人非小細胞肺癌細胞

PANC-1 人胰腺癌細胞

RBE 人肝膽管癌細胞

SAOS-2 人成骨肉瘤細胞

SiHa 人子宮頸鱗癌細胞

NB 4 急性早幼粒細胞白血病細胞

SPC-A-1 人肺腺癌細胞

SW480 人結(jié)腸癌細胞

U-87MG 人腦星形膠質(zhì)母細胞瘤細胞

ZR-75-1 人乳腺癌細胞

SW1116 人結(jié)腸腺癌細胞

293A 人胚腎細胞

SGC-7901 人胃腺癌細胞

Ishikawa 人子宮內(nèi)膜癌細胞

Eca-109 人食管癌細胞

RD-ES 人尤文氏肉瘤

NCI-H1437 人肺癌細胞

HOS 人骨肉瘤細胞

Hela S3 人宮頸癌細胞

ECC1 人宮頸內(nèi)膜腺癌細胞

SUP-B15 人Ph+急淋白血病細胞系

TF-1 人血液白血病細胞

NCI-H446 人小細胞肺癌細胞

GES-1 人胃正常黏膜上皮細胞

IOSE80 人卵巢正常上皮細胞株

sw-13 人腎上腺皮質(zhì)小細胞癌細胞

KGN 人卵巢顆粒細胞癌

U937 人組織細胞淋巴瘤細胞

SV-HUC-1 人膀胱上皮永生化細胞

tpc-1 人乳頭瘤狀甲狀腺癌細胞

hela-luci Luciferase穩(wěn)定表達Hela細胞

colo320 人結(jié)腸癌細胞

bxpc-3 人胰腺腺癌細胞

raji 人Burkitt's淋巴瘤細胞

5637 人膀胱癌細胞

chang-liver 人肝細胞(已被hela污染）

a549-gfp gfp標記的A549細胞

hs578.t 人乳腺癌細胞

T24 人膀胱移行細胞癌細胞

K562 人慢性髓系白血病細胞

EH-GB1 人膽囊癌細胞

skov-3 人卵巢腺癌細胞

ECV304 人膀胱癌細胞（T24衍生物）

nci-n87 人胃癌細胞

B-CPAP 人甲狀腺癌細胞

NCI-H1975 人非小細胞肺腺癌細胞

HK-2 人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細胞

J82 人膀胱癌細胞

A431 人皮膚鱗癌細胞

MG63 人骨肉瘤細胞

SW48 人結(jié)腸癌細胞

ME180 人宮頸表皮樣癌

hepaRG-GFP Gfp標記的人肝癌細胞

BEAS-2B 人正常肺上皮細胞

THP-1   人髓系白血病單核細胞

PC-9 人肺癌細胞

Fadu 人咽鱗癌細胞

Huh7 人肝癌細胞

HCCC9810 人肝癌細胞

Jurkat cloneE6-1 人急性T淋巴細胞白血病細胞

KBM-7 人慢性粒細胞白血病細胞

GBC-SD 人膽囊癌細胞

JEKO-1 人套細胞淋巴癌細胞

CAL-27 人口腔鱗癌

DB 彌漫大B細胞淋巴瘤細胞

mp38

nci-h226 人肺鱗癌細胞

hepg2.2.15 人肝癌細胞

SK-BR-3 人乳腺腺癌細胞

SNU-1 人胃癌細胞

su-dhl-6 人B細胞淋巴瘤細胞

HL-60 人早幼粒急性白血病細胞株

nk-92mi 人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞

kg-1 人急性骨髓性白血病細胞

nci-h209 人小細胞肺癌細胞

sk-hep-1 人肝癌細胞

sw579 人甲狀腺鱗癌細胞

nthy-ori-3-1 人甲狀腺正常細胞

bt474 人乳腺導管癌細胞

ncm460 人正常結(jié)腸上皮細胞

hmec-1 人微血管內(nèi)皮細胞

mrc5 人胚肺細胞株

t2 (atcc) 人T2細胞

22rv1 人前列腺癌細胞

hct8 人結(jié)直腸腺癌細胞

786-o 人腎透明細胞腺癌細胞

SKOV3-GFP 轉(zhuǎn)染GFP的人卵巢癌細胞

RKO 人結(jié)腸癌細胞

calu-1 人肺癌細胞

kb 人口腔表皮樣癌細胞

ovcar3 人卵巢腺癌細胞

u937-dc-sign 人組織細胞淋巴瘤細胞

a375 人惡性黑色素瘤瘤株

u2OS 人成骨肉瘤細胞

h69ar 人小細胞肺癌細胞

sk-mel-28 人皮膚惡性黑色素瘤

95D 人高轉(zhuǎn)移肺癌細胞

nci-h226 人肺鱗癌細胞

calu3 人肺腺癌細胞

C666-1 人鼻咽癌細胞

HT1080 人纖維肉瘤細胞

ASPC-1 人胰腺癌細胞

TT 人髓樣甲狀腺腫瘤細胞

NOZ 人膽囊癌細胞

HCCLM3 人高轉(zhuǎn)移肝癌細胞

mda-mb-453 人乳腺癌細胞

TFK-1 人膽管癌細胞

FHs 74 Int 人小腸上皮細胞

H9胚胎干細胞 人胚胎干細胞

caki-2 人腎透明細胞癌細胞

mda-mb-231 人乳腺癌細胞

pc3 人前列腺細胞

國產(chǎn)無外泌體血清（WINSERA® FBS050-EXO）

如何鑒定提取出來的外泌體？

以目前外泌體的分離手段很難獲得十分純凈而且單一的外泌體樣品，也沒有任何一個單一實驗可以確定外泌體的存在。根據(jù)國際細胞外囊泡協(xié)會發(fā)表的指導手冊《MISEV 2018》，外泌體特征鑒定通過NTA測粒徑分布、TEM電鏡分析形態(tài)、WB檢測標志蛋白三項來驗證。NTA分析樣品中外泌體的粒徑分布和顆粒濃度，TEM電子顯微鏡來觀察樣品中外泌體的形態(tài)特征，WB檢測外泌體標志蛋白。

外泌體如何保存？

不同時間、溫度的保存對不同的外泌體樣本影響不一；如果研究方向為外泌體形態(tài)特征、蛋白或其他功能性分析，在分離后新鮮使用為最佳。目前主流的建議是提取出外泌體后最好是新鮮使用，或低溫短期保存。

短時間幾天內(nèi)可以放4°C，長時間儲存置于-80°C保存。

NTA檢測可以進行外泌體定量嗎？

NTA是物理方法，基于顆粒的布朗運動，因為不管是脂質(zhì)體、蛋白，甚至是PBS中的顆粒（部分實驗室自行配置的PBS中發(fā)現(xiàn)大量顆粒，推薦在外泌體研究中，用VC品牌的PBS（P/N:C3580-0500），避免干擾），都會被軟件讀取，并不能分辨是否為外泌體。但NTA提供的粒徑分布可供判斷所提取的內(nèi)含物是否在外泌體的粒徑范圍內(nèi)；另外，在做外泌體分泌的對比實驗中，NTA提供的濃度值也可以作為重要的參考數(shù)據(jù)。

外泌體NTA檢測需要多少量？

Zetaview儀器的最佳檢測區(qū)間是10^7 particles/ml，且有濃度檢測下限，為10^5 particles/ml，一般進樣量不少于2 ml；

無法準確建議送樣量，檢測需要量與樣本本身濃度有關(guān)，樣本濃，則用量小，反之則多，根據(jù)檢測經(jīng)驗，樣本取用量一般在2 µl-100 µl不等，取用量大于50 µl時大多由于樣本分泌量過低、提取失敗或者對樣本有過多稀釋。

一般建議：送樣量不低于30 µl。

外泌體用什么分離方法比較好？

無法明確哪種分離方法比較好，各有千秋，以下列出常用的外泌體分離方法：

超速離心法（差速離心和密度梯度離心）：操作繁瑣，耗時長，分離外泌體純度較高，但得率低，目前分離外泌體主流方法；

尺寸排阻色譜（Size-exclusion chromatography，SEC）：應(yīng)用填充多孔聚合物微球的柱子，精確分離大小分子，操作簡便，耗時短，分離外泌體純度較高；

聚合物沉淀法：操作簡便，耗時短，可能會同時分離非囊泡污染物（包括脂蛋白），分離外泌體純度較低；

磁珠免疫法：通過特定的抗體組合從樣本中捕獲不同類型的外泌體，免疫親和技術(shù)具有高特異性、可獲得高純度的外泌體、且不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點，是富集表征*的外泌體的優(yōu)選方法。但是此方法效率低，外泌體內(nèi)含物的生物活性易受pH和鹽濃度影響，不利于下游實驗的進行。

組合方法：如聚合物沉淀法+SEC (CellGS Exo-spin 外泌體純化試劑盒）純化流程溫和，無需高速離心，操作簡便并且產(chǎn)物純度高，分離出的外泌體完好無缺，適用于下游功能研究、WB驗證、RNA分析等。

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