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外泌體的研究離不開細(xì)胞培養(yǎng)。以腫瘤相關(guān)外泌體研究為例,目前,收集腫瘤細(xì)胞外泌體主要有兩種方法:
方法一
使用正常培液養(yǎng)細(xì)胞再換無血清培液收外泌體。
方法二
直接使用exosome-free FBS配制培養(yǎng)基用于培養(yǎng)細(xì)胞收外泌體。
首先,就是基本的離心條件了,目前超離比較好的就是貝克曼或者日立的了,這兩家超離在行業(yè)內(nèi)算是翹楚了。其次就是離心參數(shù)了:120000 g,4℃,離心14h,離心結(jié)果如圖:
1:離心后,血清外泌體會富集在管底和管壁;
2:吸取血清時,只吸取澄清部分的血清,并且遠(yuǎn)離上圖中標(biāo)記的區(qū)域;
3:吸取70-80%的澄清的血清;(注意:動作慢,動作輕)
4:其余的渾濁血清留作正常細(xì)胞的的營養(yǎng)物添加使用,避免浪費。
5:如果覺得純度不夠,再把離心后收集的血清做二次超速離心。
6:針對超速離心后的血清,必須進(jìn)行粒徑檢測(離心前樣品和離心后樣品),該數(shù)據(jù)可以放到文章補充材料中,用來證明無血清外泌體制備成功。
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