小鼠黑色素瘤細胞熒光素酶標記B16-F10+LUC

細胞名稱：小鼠黑色素瘤細胞熒光素酶標記

培養(yǎng)條件：DMEM(含NaHCO3 1.5g/L)+10%FBS+1%P/S   

生長狀態(tài)：貼壁+懸浮（成團生長）

人子宮內(nèi)膜腺癌細胞 HEC-1-A McCOY'S 5A+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

人子宮內(nèi)膜腺癌細胞 HEC-1-A McCOY'S 5A+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

人子宮膜腺癌細胞 HEC-1-B MEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

人胚腎細胞 HEK-293（293） MEM+10%FBS+1%P/S 貼壁+懸浮生長

人胚腎細胞HEK-293細胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株（KCNA5（human NaV1.5-egfp） HEK-293+EGFP MEM+10%FBS+1%P/S 貼壁+懸浮生長

人胚腎細胞 HEK-293A DMEM+10%FBS+1%P/S 貼壁+懸浮生長

人紅白細胞白血病細胞 HEL 1640+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

人子宮頸癌細胞 HELA MEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

人宮頸癌細胞熒光素酶標記 HELA+LUC   MEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

人宮頸癌細胞 chang liver  MEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

人宮頸癌細胞 HeLa.S3 F12K+10%FBS+1%P/S   貼壁生長

人肝癌細胞 hepg2.2.15 MEM+10%FBS+0.38mg/ml G418+1%P/S 貼壁生長

人肝癌細胞 Hep3B2.1-7 [Hep3B] MEM+10%FBS+1% L-谷氨酰胺+1%NEAA+1%P/S 貼壁生長

人肝癌細胞 HEPG2 MEM+10%FBS+1%P/S   貼壁生長

人肝癌細胞+GEP hepG2+GFP MEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

人肺成纖維細胞 HFL1 F12k+10%FBS+1%PS 貼壁生長

人 SV40  轉(zhuǎn)染成骨細胞 HFOB1.19 DMEM/F12+10%FBS+0.3mg/ml G418+1%P/S 33.5℃ 貼壁生長

人胃癌細胞 HGC-27 DMEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細胞 HK-2 角質(zhì)無血清培養(yǎng)基（D-KSFM 推薦：iCell-019） 貼壁生長

人腎上皮細胞 HKb-20 DMEM+10%FBS+800μg/ml G418+1%P/S 貼壁生長

人早幼粒白血病細胞 HL 60（hl-60） IMDM+20%FBS+1%P/S   懸浮生長

人肝細胞 HL-7702[L-02] 1640+20%FBS+1%P/S 貼壁生長

人小膠質(zhì)細胞 HMC3 MEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

人高轉(zhuǎn)移卵巢癌細胞 HO-8910PM 1640+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

人骨肉瘤細胞 HOS MEM+10%FBS+1%NEAA+1%P/S 貼壁生長

人胰腺癌細胞 HPAC D/F12+5%FBS+0.002mg/ml胰島素+0.005mg/ml轉(zhuǎn)鐵蛋白+40ng/ml氫化的松+10ng/ml表皮生長因子EGF +1%P/S 貼壁生長

人胎盤細胞（有限細胞系） Hs 815.Pl DMEM+10%FBS+1%P/S   貼壁生長

人乳腺癌細胞 HS578T DMEM+0.01mg/ml牛胰島素+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

人腦膠質(zhì)瘤細胞 HS683 DMEM+15%FBS+1%P/S   貼壁生長

人真皮成纖維細胞（原代細胞永生化） HSF(SV40) D/F12+10%FBS+1%p/s+0.005mg/ml胰島素+5ng/mlBfGF+1ug/ml氫化的松+50ug/ml抗壞血酸（維C）+7.5mM L-Gln (推薦：PriMed-iCell-003) 貼壁生長

人纖維肉瘤細胞 HT-1080 MEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

人膀胱癌細胞 HT-1376 MEM+10%FBS+1%P/S   貼壁生長

人結(jié)腸癌細胞 HT-29 (HT29) McCOY's 5A +10%FBS+1%P/S 貼壁生長

人眼小梁網(wǎng)細胞 HTMC DMEM/F-12+15%FBS+1%P/S 貼壁生長

人胰腺導管細胞 HPNE 75%DMEM(無糖)+25%Medium M3 +5%FBS+10ng/mlrh EGF+2.5mM D-葡萄糖+750 ng/ml 嘌呤霉素+1%P/S 貼壁生長

人肝母細胞瘤細胞 HUH-6 DMEM(含NaHCO3 1.5g / L)+10%FBS +1%P/S 貼壁生長

人肝癌細胞 huh-7 DMEM(含NaHCO3 1.5g / L)+10%FBS +1%P/S 貼壁生長

人肝癌細胞 huh-7.5.1 DMEM(含NaHCO3 1.5g / L)+10%FBS +1%P/S 貼壁生長

人T淋巴細胞白血病細胞 HUT-78 IMDM+20%FBS+1%PS 懸浮生長

人十二脂腸腺癌 HUTU-80 MEM+10%FBS+1%P/S    貼壁生長

人臍靜脈內(nèi)皮細胞（原代細胞永生化） HUVEC 內(nèi)皮細胞培養(yǎng)體系（PriMed-iCell-002） 貼壁生長

人臍靜脈內(nèi)皮細胞 HUV-EC-C 內(nèi)皮細胞培養(yǎng)體系（PriMed-iCell-002） 貼壁生長

人臍靜脈內(nèi)皮細胞永生化+RFP HUVEC+RFP 內(nèi)皮細胞培養(yǎng)體系（PriMed-iCell-002） 貼壁生長

人臍靜脈內(nèi)皮細胞永生化+GFP HUVEC+GFP 內(nèi)皮細胞培養(yǎng)體系（PriMed-iCell-002） 貼壁生長

人誘導多能干細胞 iPS *培養(yǎng)基500ml++細胞消化液500ml+復蘇專用因子1mg+matrix基質(zhì)膠5ML 貼壁生長

人子宮內(nèi)膜癌細胞 Ishikawa MEM+15%FBS+1%NEAA+1%P/S 貼壁生長

人正常卵巢上皮細胞系 IOSE-80（IOSE80;NFHIOSE-80;IOSE80UBC;IOSE-Van; IOSE-VAN） 1640+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

人胚肺成纖維細胞 IMR-90 MEM+20%FBS+1%P/S 貼壁生長

人急性T細胞白血病細胞 J.gamma1 1640+10%FBS+1%P/S 懸浮生長

人膀胱移行細胞癌 J82 MEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

人胎盤絨毛癌細胞 JAR 1640+10%FBS+1%丙酮酸鈉+1%P/S 貼壁生長

人胰腺癌細胞 JF-305 1640+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

人絨毛膜癌細胞 JEG-3 MEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

人T淋巴細胞白血病細胞 Jurkat（clone E6-1） 1640+10%FBS+1% L-谷氨酰胺+1%丙酮酸鈉+1%P/S 懸浮生長

人慢性骨髓性白血病細胞系 K562 IMDM + 10%FBS+1%P/S 懸浮+貼壁（少量）生長

人K562耐阿霉素細胞株 K562/ADR 1640+10%FBS+1%P/S+1ug/mlADR 懸浮+貼壁（少量）生長

人口腔表皮癌細胞 KB MEM+10%FBS +1%P/S 貼壁生長

人急性髓性白血病細胞 KG-1a IMDM + 10%FBS+1%P/S 懸浮生長

人卵巢顆粒細胞瘤細胞 KGN D/F12+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

人腦膠質(zhì)細胞瘤細胞 KNS-89 DMEM +10%FBS+1%P/S 貼壁生長

人外周血嗜堿性白血病細胞 KU812 1640+10%FBS+1%P/S   懸浮生長

人食道癌細胞 kyse30 48%1640+48%F-12+2%FBS+1%L-谷氨酰胺+1%P/S 貼壁生長

人肝癌細胞 Li-7 1640+10%FBS+1% L-谷氨酰胺+1%丙酮酸鈉+1%P/S 貼壁生長

人膠質(zhì)瘤細胞 LN229 DMEM+5%FBS+1%P/S   貼壁生長

人前列腺癌細胞 LNCaP clone FGC 1640+10%FBS+1% L-谷氨酰胺+1%丙酮酸鈉+1%P/S 貼壁生長

人結(jié)直腸癌細胞 lovo F12K+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

人結(jié)直腸癌細胞氟尿嘧啶耐藥株 LOVO/5FU F12K+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

人結(jié)直腸癌細胞熒光素酶標記 LOVO+LUC F12K+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

人結(jié)直腸腺癌細胞 LS174T  MEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

人結(jié)直腸癌細胞 LS180 MEM+10%FBS+1%P/S 該細胞不能使用胰酶消化 貼壁生長

人結(jié)直腸癌細胞 LS513 1640+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

人肝星形細胞 LX-2 1640+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

 

細胞培養(yǎng)注意事項：

一、污染防控

細胞培養(yǎng)最基本的是做好污染防控，包括微生物污染的防控和細胞系間交叉污染的防控。

實驗中需保持良好的操作習慣，所用材料的位置擺放要順手，污染源和已滅菌物品要分開放置。實驗室也需定期清潔與消毒。

二、血清與培養(yǎng)基

 

通常血清的添加比例為10%，當然也可根據(jù)細胞狀態(tài)和生長速率適當增加或減少添加比例。在更換血清品牌或者批次時，最好需對血清的品質(zhì)進行驗證，防止對實驗造成影響。

對于培養(yǎng)基，目前商品化的比較成熟，穩(wěn)定性也較好。如若需自配培養(yǎng)基時，過濾前攪拌時間不宜過長（培養(yǎng)基中營養(yǎng)豐富，細菌常溫下20min就可繁殖一代，其代謝產(chǎn)物會對培養(yǎng)基的品質(zhì)產(chǎn)生影響）。培養(yǎng)基過濾除菌后，應對培養(yǎng)基進行無菌驗證，防止污染。

 

三、細胞培養(yǎng)瓶

目前商品化的細胞培養(yǎng)瓶主要為瓶蓋是否帶氣孔兩種。其中不帶透氣孔細胞培養(yǎng)瓶擰緊后需適當回旋瓶蓋，保證CO₂能順利進入細胞培養(yǎng)瓶。

細胞培養(yǎng)過程中，對于適應能力強的腫瘤細胞，可在傳代3-4次后更換新的細胞培養(yǎng)瓶。對于非腫瘤細胞系如293T，HEK293等細胞，建議每次傳代更換新的細胞培養(yǎng)瓶來保證細胞狀態(tài)。

四、細胞傳代

 

正常細胞形態(tài)較好，輪廓清晰，邊緣透亮，細胞增殖狀況良好。當貼壁細胞長到密度90%時，需進行傳代。

傳代時通常使用胰酶消化法。該方法又分為干消化法和濕消化法。

干消化法：胰酶浸潤后棄去胰酶，待細胞變圓后加入新鮮培養(yǎng)基吹下后再進行細胞傳代。

濕消化法：待細胞變圓，肉眼觀察下成流沙狀脫落時即可加入新鮮培養(yǎng)基終止消化，1000rpm離心5min,棄去上清，用新鮮培養(yǎng)基重懸傳代。

吹打細胞時，手法要輕柔，避免吹打出氣泡，造成細胞因內(nèi)外壓差破裂，同時需避免刮到瓶壁影響細胞的貼壁。

不同細胞的貼壁能力不同，消化時間不同；不同細胞細胞間連接強度不一樣，消化時間不同；同一細胞生長狀狀況不同，消化時間不同。消化時適時觀察細胞形態(tài)，避免因過度消化影響細胞活性。

       傳代間隔時間和傳代比例因細胞而異。細胞傳代過程中，當細胞出現(xiàn)狀態(tài)不好或者污染時及時棄去細胞，重新復蘇。

 

五、細胞凍存與復蘇

 

當細胞生長狀況較好或者代數(shù)較早時，需及時大量的凍存。

細胞凍存液比例為培養(yǎng)基：血清：DMSO=7:2:1，也可血清：DMSO=9:1。細胞凍存密度通常為1-3×10⁶個/ml。細胞凍存采用慢凍方式，減少冰晶形成，避免細胞損傷。通常4℃放置0.5 h，-20℃放置2 h，-80℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內(nèi)。

細胞復蘇時升溫要快，防止在解凍過程中水分進入細胞，形成冰晶，影響細胞存活。38℃水浴不時搖動，在1分鐘內(nèi)使其*融化，1000rpm離心5min,棄去上清，用新鮮培養(yǎng)基重懸移入培養(yǎng)瓶中。

 

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