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動(dòng)物血清的定義:
血清,指血液凝固后,在血漿中除去纖維蛋白原及某些凝血因子后,分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原已被除去的血漿。血清的主要作用是提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),包括激素、維生素、轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、微量元素、擴(kuò)散因子和生長(zhǎng)因子等細(xì)胞增殖和維持的必需成分,促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)。
動(dòng)物血清的分類:
1、按來(lái)源動(dòng)物分
常見的血清供體動(dòng)物,主要有牛、馬、豬、兔、雞等。
2、按照牛的年齡分
市場(chǎng)上常見的牛血清,根據(jù)采血時(shí)間不同和血清采制方法分為:又可以分為胎牛、新生牛、小牛血清和成年牛血清:胎牛血清(Foetal Bovine Serum,簡(jiǎn)稱FBS):5-8月未出生胎牛,人工引產(chǎn)胎牛心臟穿刺取血;新生牛血清(Newborn Calf Serum,簡(jiǎn)稱NBCS):出生14小時(shí)內(nèi)未進(jìn)食的新生牛,通常采用頸動(dòng)脈采集血液分離得到的血清;小牛血清(Calf Serum):出生后1-12月齡小牛動(dòng)脈采血分離血清;成年牛血清(Adult Bovine Serum,簡(jiǎn)稱ABS):一歲以上成年牛,屠宰時(shí)收集全血后分離得到血清。
以上取血牛齡的差異主要是受當(dāng)?shù)貒?guó)家畜牧業(yè)的發(fā)展及法規(guī)限制影響,因?yàn)榕Q酁樾竽翗I(yè)副產(chǎn)業(yè),并未有專門為取血而養(yǎng)的牛。不同牛齡血清所含的促細(xì)胞生長(zhǎng)因子、促貼附因子、激素及其他活性物質(zhì)等組分與比例不同。常規(guī)來(lái)說(shuō),年齡越小的牛血清,細(xì)胞培養(yǎng)效果越好。其中胎牛由于還未接觸外界,血液中所含抗體、補(bǔ)體等對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)有害的成分最少,血清的質(zhì)量高。根據(jù)血清質(zhì)量從優(yōu)到次排序依次為,胎牛>新生牛>小牛>成年牛。所以目前多數(shù)科研人員選擇胎牛血清進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。
3、按照采集地點(diǎn)分
根據(jù)血源采集地不同,大致又可以分為澳洲、北美、南美及中國(guó)四大類。
從血源質(zhì)量、加工工藝、質(zhì)控上區(qū)分,從優(yōu)到次排序依次是澳洲>北美>南美>國(guó)產(chǎn)。特別是生產(chǎn)過(guò)程中,澳洲和北美大多采用靜置分層工藝,對(duì)紅細(xì)胞破壞小,血清中的血紅蛋白和膽紅素較少,顏色呈透明的淡黃色;而南美則大多采用離心收集工藝,紅細(xì)胞破壞較多,血清中血紅蛋白和膽紅素較多,顏色偏紅。
根據(jù)不同品質(zhì)分:
區(qū)分胎牛血清很重要的一點(diǎn)就是血清的內(nèi)毒素含量,內(nèi)毒素含量越低的血清,級(jí)別就越高,以胎牛血清為例:當(dāng)血清中內(nèi)毒素含量≤10EU/ml時(shí),此血清為特級(jí)胎牛血清;當(dāng)血清中內(nèi)毒素含量﹥10EU/ml,≤ 25EU/ml時(shí),此血清為優(yōu)級(jí)胎牛血清;當(dāng)血清中內(nèi)毒素含量≥ 25EU/ml時(shí),此血清為標(biāo)準(zhǔn)級(jí)胎牛血清;目前,由于同一廠家,不同批次的血清,內(nèi)毒素?cái)?shù)值也可能有較大差異,因此很多血清廠家在名稱上已不注明級(jí)別。但使用者仍可通過(guò)檢測(cè)報(bào)告進(jìn)行甄別。
根據(jù)不同處理分:
透析胎牛血清:透析過(guò)濾去除10kD以下小分子(如次黃嘌呤和胸腺核苷),避免外源小分子對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生干擾。適合脈沖示蹤實(shí)驗(yàn)(例如同位素標(biāo)記特定小分子加入到培養(yǎng)體系中,以研究細(xì)胞代謝),也適合轉(zhuǎn)染CHO后的篩選等應(yīng)用。去外泌體血清:通過(guò)超速離心法去除絕大部分外泌體的血清,適用于外泌體相關(guān)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究。超低lgG的血清:使用親和層析等工藝,去除IgG,使其水平低于標(biāo)準(zhǔn)值,適用于抗體、病毒和病毒反應(yīng)以及細(xì)胞表面抗原表位相關(guān)研究。活性炭/葡聚糖處理的血清:可降低血清中類固醇激素的濃度,例如雌二醇、孕酮、皮質(zhì)醇、睪酮、T3 和 T4。適用于相關(guān)激素研究的實(shí)驗(yàn)。
其他動(dòng)物源血清:
馬血清:一般分為兩種:第一種馬血清含有的大分子蛋白比較多,適用于蛋白封閉;第二種馬血清為細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)別。經(jīng)過(guò)多次過(guò)濾,去除大多數(shù)大分子蛋白,但保留了血清中促細(xì)胞生長(zhǎng)的活性因子,適用于細(xì)胞培養(yǎng),例如神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),培養(yǎng)基中需要添加馬血清。豬血清:常用于豬肺炎支原體疫苗的生產(chǎn)。在對(duì)細(xì)胞和活疫苗進(jìn)行支原體檢驗(yàn)中,《獸藥典》明確推薦豬血清作為支原體檢驗(yàn)用液體培養(yǎng)基的組成成分。兔血清:兔血清通常從六個(gè)月或更小的動(dòng)物身上收集,可用于免疫細(xì)胞化學(xué)和免疫組織化學(xué)中的封閉血清。羊血清:多用做封閉液,也有一些研究人員發(fā)現(xiàn),優(yōu)質(zhì)的羊血清可用于某些細(xì)胞的培養(yǎng)。雞血清:從屠宰供人類食用的健康雞中收集的。有研究用于血清維生素 B12 的放射性同位素稀釋測(cè)定。
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