您好,歡迎來到蘇州千舍生物科技有限公司!
加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。啟動(dòng)的補(bǔ)體系統(tǒng)參與溶解細(xì)胞事件,刺激平滑肌收縮,細(xì)胞和血小板釋放組胺,啟動(dòng)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞活化。在免疫學(xué)研究中,培養(yǎng)ES細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí),推薦使用熱滅活血清。
血清熱滅活的步驟在1970年代就已建立,至今成為很多實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)血清前處理步驟;但許多先前認(rèn)為必須熱滅活的原因,卻早已經(jīng)不再成立:
去除支原體污染?
早期血清加工使用的450nm濾膜,早已被100nm濾膜取代;且隨著加工技術(shù)的創(chuàng)新及嚴(yán)格的監(jiān)控,血清產(chǎn)品早已沒有支原體污染的疑慮。
去除補(bǔ)體等對(duì)熱敏感的物質(zhì)?
胎牛血清中含有的補(bǔ)體僅為成年牛血清5-50%,而C3(補(bǔ)體中引起免疫反應(yīng)的主成分)在胎牛血清中則幾乎不能檢出,直接使用血清對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞株沒有負(fù)面影響。
實(shí)驗(yàn)顯示,大多數(shù)的細(xì)胞不需要熱滅活血清,對(duì)于非必須的細(xì)胞來說血清滅活對(duì)于細(xì)胞生長只有微小甚至無任何作用,還可能造成生長速率降低,沉淀物還會(huì)顯著增多,不利于細(xì)胞觀察。因此,若非必須,不需要對(duì)血清進(jìn)行滅活處理。
細(xì)胞生物學(xué)家比較了正常熱滅活胎牛血清對(duì)各種細(xì)胞株的生長能力影響,發(fā)現(xiàn)11株細(xì)胞中,熱滅活對(duì)6 株細(xì)胞有負(fù)面影響(紅)、3株無影響(綠)、2株有微弱正面改善(黃)。
▲ 使用未滅活或滅活血清的細(xì)胞生長狀況
所以,在正常操作下,熱滅活通常對(duì)“細(xì)胞生長"沒有明顯的促進(jìn)作用,反而會(huì)破壞血清內(nèi)生長因子,維生素,氨基酸等珍貴物質(zhì),降低細(xì)胞增殖速度。
若實(shí)驗(yàn)員設(shè)錯(cuò)水浴溫度或忘記按計(jì)時(shí)器,都會(huì)導(dǎo)致過高的加熱溫度(下圖)或過長的加熱時(shí)間(下圖),進(jìn)而大大降低血清的功能,影響細(xì)胞生長的表現(xiàn)。
缺點(diǎn)1:
▲ 過高的加熱溫度降低大多細(xì)胞株生長速度(僅一株未受明顯影響)
缺點(diǎn)2:
▲ 過長的加熱時(shí)間降低大多細(xì)胞株生長速度
(僅一株未受明顯影響)
滅活加熱過程會(huì)增加血清的沉淀狀況,而沉淀又常常被認(rèn)為是微生物的污染,進(jìn)而耗費(fèi)大量時(shí)間及精力驗(yàn)證是否污染,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)一再拖延。